NSND Trọng Khôi sinh năm 1943 tại Hà Nội, trong một gia đình có 7 người con và ông là con trai cả. Năm 1963, ông tốt nghiệp Trường Sân khấu cùng lứa với NSND Thế Anh, NSND Trần Tiến, NSND Doãn Châu v.v… Sau đó, ông là diễn viên của Nhà hát Kịch Việt
Trên con đường nghệ thuật, NSND Trọng Khôi đã có những cống hiến đáng kể cho sân khấu nước nhà. Những vai diễn của ông trong các vở “Hồn Trương Ba, da hàng thịt”, “Đời nghệ sĩ”… đã để lại những ấn tượng sâu sắc trong lòng khán giả. Với khả năng thể hiện xuất sắc các nhân vật, ông đã từng được đi biểu diễn ở nhiều nước:
Bên cạnh lĩnh vực sân khấu, NSND Trọng Khôi còn ghi được những dấu ấn trong điện ảnh với các vai diễn: Thiếu tá Khanh trong Trừng phạt, Trung tá Thi trong phim Huyền thoại về người mẹ, Bảy Tú trong phim Săn bắt cướp, Ba Đức trong Đứng trước biển và Nghị Hách trong phim Giông tố...
Không chỉ đóng góp cho sân khấu và điện ảnh bằng các vai diễn, NSND Trọng Khôi còn tham gia dàn dựng nhiều vở kịch cho các đơn vị nghệ thuật, đồng thời, còn hoạt động đào tạo diễn viên trẻ với việc giảng dạy tại các Trường Cao đẳng, Đại học Sân khấu - Điện ảnh.
Đặc biệt, NSND Trọng Khôi còn là một cộng tác viên thân thiết của Báo CAND trong nhiều chương trình nghệ thuật. Tại chương trình “Ngẫu hứng Hữu Ước”, ông đã cùng các nghệ sĩ nhân dân tên tuổi: Trần Tiến, Thế Anh, Doãn Châu, Trần Hiếu, Quang Thọ v.v… đã có tiết mục độc đáo trong 7 đêm diễn liền và đã để lại những ấn tượng đặc biệt với khán giả.
Chiều 14/3, NSƯT Lê Chức, Phó Chủ tịch Hội Nghệ sĩ Sân khấu Việt Nam, cho biết: Lễ tang NSND Trọng Khôi sẽ được tổ chức trọng thể từ 7h đến 9h30 ngày 19/3, tại nhà tang lễ số 5 Trần Thánh Tông, Hà Nội và an táng tại Đài hóa thân Hoàn Vũ